摘要：以靖江香沙芋莖尖為外植體進(jìn)行快速繁殖技術(shù)研究。結(jié)果表明，75%乙醇浸泡30 s和84消毒液消毒10～15 min配合使用滅菌效果最好;芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L TDZ，培養(yǎng)25 d后芽誘導(dǎo)率最高，為80%，芽高度為2.3 cm;繼代增殖最適培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L TDZ，月增殖倍數(shù)可達(dá)4.3;生根培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為1/2MS+01 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.02%活性炭，平均生根時(shí)間為11 d，生根率達(dá)100%，根系最長(zhǎng)為2.9 cm;生根培養(yǎng)45 d，將試管苗移入營(yíng)養(yǎng)土中生長(zhǎng)，30 d后移栽成活率達(dá)100%。

　　關(guān)鍵詞：靖江香沙芋;組織培養(yǎng);芽誘導(dǎo);快繁

　　靖江香沙芋屬天南星科(Araceae)芋屬(Colocasia) 多子芋類(lèi)型，是靖江市農(nóng)民栽培的芋類(lèi)作物當(dāng)家品種。其塊莖中淀粉含量高，既可以當(dāng)糧食，又可做蔬菜，是老幼皆宜的滋補(bǔ)品，并含有多種維生素，有一股獨(dú)特的香味。加工前景廣闊，聞名并暢銷(xiāo)廣西、廣東及港、澳地區(qū)。靖江香沙芋通常采用母芋留種方式進(jìn)行繁殖，種性退化問(wèn)題較為突出，抗病性和抗逆性減退。建立靖江香沙芋組培再生體系，不僅有利于品種的更新復(fù)壯，更可為種苗工廠化生產(chǎn)和新品種選育提供技術(shù)支持與儲(chǔ)備。

　　近年來(lái)，芋組織培養(yǎng)已相繼開(kāi)展，對(duì)其莖尖和葉片等不同外植體培養(yǎng)進(jìn)行了廣泛的研究[1-5]。但這些研究主要圍繞外植體愈傷誘導(dǎo)及植株再生，而愈傷誘導(dǎo)過(guò)程中易發(fā)生變異，不利于保持本品種的優(yōu)良特性。本研究旨在建立一種從芽直接到多芽體，多芽體到試管苗的繁殖方式。這種繁殖方式不僅可以提高繁殖系數(shù)和繁殖速度，而且利于保持本品種的優(yōu)良特性，可有效保護(hù)具有地方特色的種質(zhì)資源。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　供試材料為靖江香沙芋芋莖尖。

　　1.2方法

　　1.2.1無(wú)菌材料的處理選取保存完好、無(wú)腐爛斑點(diǎn)的芋，經(jīng)0.2%的K2MnO4消毒5 min后整齊排列在周轉(zhuǎn)箱中，用沙子覆蓋到整個(gè)芋塊的2/3處，放置到光照培養(yǎng)箱中催芽。待芽生長(zhǎng)到1～3 cm時(shí)切取莖尖，剝除外層2～3層葉片，流動(dòng)水沖洗10 min，在超凈臺(tái)上用75%乙醇浸泡30 s，分別用NaClO、84 消毒液2種消毒劑，NaClO設(shè)10、15、20 min，84消毒液設(shè)5、10、15 min 3個(gè)時(shí)間段處理滅菌，每種處理分別接種12個(gè)莖尖于MS培養(yǎng)基中，觀察滅菌效果。

　　1.2.2芽誘導(dǎo)分化外植體經(jīng)滅菌后接種在添加不同濃度的6-BA和NAA及TDZ和IBA組合的MS培養(yǎng)基中，接種25 d后比較芽的分化率、芽高度及葉片數(shù)等確定適宜芽分化的培養(yǎng)基。激素濃度設(shè)置7個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)接種15個(gè)莖尖。

　　1.2.3繼代增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上萌發(fā)出的不定芽長(zhǎng)到2 cm左右時(shí)，切取單芽接種在添加不同濃度的6-BA和NAA及TDZ和IBA組合的MS培養(yǎng)基中，30 d時(shí)觀察其增殖倍數(shù)。激素濃度設(shè)置6個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)接種20個(gè)單芽。

　　1.2.4生根將高2.0 cm以上、帶有2張或2張以上葉的健壯小苗切下，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。生根基本培養(yǎng)基為1/2MS并添加0.02%活性炭。調(diào)查不同處理的平均生根時(shí)間，30 d的生根數(shù)、生根率、葉片數(shù)、根系平均長(zhǎng)度及根系形態(tài)。生根培養(yǎng)基設(shè)置4個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)接種15個(gè)小苗。

　　1.2.5煉苗與移栽生根培養(yǎng)45 d的再生苗在室外常溫下放置5 d后，打開(kāi)瓶蓋煉苗1～2 d。將根系發(fā)達(dá)、株高5～12 cm 的再生苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去根部的培養(yǎng)基，移栽到營(yíng)養(yǎng)土中，并置于相對(duì)濕度80%～90%、溫度20～25 ℃的環(huán)境中遮陰培養(yǎng)1周，2周后正常光照培養(yǎng)，30 d時(shí)統(tǒng)計(jì)成活率。

　　1.2.6培養(yǎng)基滅菌及培養(yǎng)條件高壓滅菌前調(diào)整培養(yǎng)基pH值為5.8，保持121 ℃滅菌20 min。培養(yǎng)室溫度為(25±2) ℃，光照度2 000～3 000 lx，每天光照12 h。培養(yǎng)基中瓊脂的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7 g/L，蔗糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30 g/L。

　　2結(jié)果與分析

　　2.1不同消毒液和滅菌時(shí)間對(duì)外植體滅菌效果的影響

　　從表1可以看出，外植體用84消毒液滅菌10～15 min效果最好，滅菌成功率達(dá)83.3%以上。NaClO滅菌成功率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于84消毒液。

　　表1不同消毒液和滅菌時(shí)間對(duì)外植體滅菌效果的影響

　　消毒劑種類(lèi)時(shí)間

　　(min)接種莖段數(shù)

　　(個(gè))污染數(shù)

　　(個(gè))污染率

　　(%)NaClO1012650.01512433.32012325.084消毒液512650.01012216.7151218.3