摘 要 為了進一步優化葵花籽粕蛋白提取和分離純化工藝，文章運用正交試驗法和參數自由組合試驗法分別進行蛋白提取試驗、蛋白分離純化試驗，旨在為工藝優化提供參考?‍‌‍?‍‌‍‌‍?‍?‍‌‍?‍‌‍?‍?‍‌‍?‍‌??‍?‍?‍‌‍?‍?‍?‍‌‍‌‍‌‍‌‍?‍‌‍?‍???‍?‍?‍?‍?‍?‍?‍‌‍?‍‌‍?‍‌‍‌‍‌‍?。

　　關鍵詞 提取；分離純化；葵花籽粕蛋白

　　目前，我國葵花籽蛋白利用率較低，蛋白提取和分離純化兩項工藝存在較大提升空間[1-2]?‍‌‍?‍‌‍‌‍?‍?‍‌‍?‍‌‍?‍?‍‌‍?‍‌??‍?‍?‍‌‍?‍?‍?‍‌‍‌‍‌‍‌‍?‍‌‍?‍???‍?‍?‍?‍?‍?‍?‍‌‍?‍‌‍?‍‌‍‌‍‌‍?。為了進一步優化工藝，文章運用正交試驗法，對工藝優化進行淺析。

　　1 試驗材料及設備

　　1.1 材料與試劑

　　（1）采用自制法制備的葵花籽粕；（2）EDTA、HCl、(NH4)2SO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaOH、NaH2PO4、分析純。

　　1.2 主要設備

　　（1）電熱恒溫箱，設備型號為DRH-100，產自廣東省環境保護儀器設備廠；（2）電子天平，設備型號為AL-104，產自梅特勒-托利多有限公司；（3）pH測試計，設備型號為pHS-3C，產自海虹益儀器儀表有限公司；（4）水浴鍋，設備型號為HH-S，產自鞏義市予華儀器有限責任公司；（5）高級蛋白純化系統，設備型號為AKTApurifier PH/C10，產自通用公司。

　　2 葵花籽粕蛋白提取工藝優化

　　2.1 提取操作要點

　　料液的調配控制比例為1:08、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18，環境溫度保持在30℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃，在水浴鍋中浸提蛋白，蛋白提取試驗時間控制為0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h，堿液pH值為12，確保堿液能夠完全溶解蛋白質。

　　2.2 試驗因素及水平

　　本次研究采取L9(34)正交試驗法，選取蛋白料液、蛋白提取時間、蛋白提取溫度、NaCl濃度作為試驗指標，設計如表1所示的因素水平[3]

　　2.3 試驗結果分析

　　文章通過開展單因素試驗，得到如圖1所示的試驗結果。

　　觀察圖1中的測試結果可知，NaCl濃度為1.5 mol/L、蛋白料液比為1:12（g/mL）、溫度為60 ℃、提取時間為1.5 h時，蛋白提取率最高。

　　2.4 工藝優化

　　基于上述單因素試驗結果，按照表1中的因素水平設置方法開展正交試驗，得到4種因素R值計算結果，分析提取溫度對工藝影響最大，料液比對工藝影響最小，確定A2、B3、C2、D2作為蛋白提取工藝優化方案，即料液比為1:14 （g/mL）、NaCl濃度為1.5 mol/L、溫度為50 ℃、提取時間為1.5h。

　　3 葵花籽粕蛋白分離純化工藝優化

　　3.1 樣品溶液與試驗方法

　　樣品溶液：20 g/L蛋白溶液。

　　試驗方法：洗脫流速參數設置為0.5 mL/min、0.4 mL/min、0.3 mL/min；溶液上樣量參數設置為1 mL、3 mL、5 mL，采取自由組合方法，生成5組試驗，利用水浴鍋，分別對蛋白采取分離純化處理[4]。

　　3.2 實驗結果分析

　　按照上述試驗方法，配置5組試驗，分別對這5組試驗蛋白分離純化結果進行分析，結果如圖2所示。

　　（1）洗脫流速0.3 mL/min，上樣量為3 mL：溶液測試結果不存在重疊峰，并且峰值較為明顯，依據此結果滿足要求，但是隨著時間的推移，受洗脫處理時間較長，測試液體下降，低于填料平面，不滿足分離純化要求。

　　（2）洗脫流速0.4 mL/min，上樣量為3 mL：溶液測試結果分辨率較高，數值變化中出現峰值，且峰形較為明顯，符合分離純化要求。

　　（3）洗脫流速0.5 mL/min，上樣量為3 mL：溶液測試結果分辨率偏低，洗脫流速較高，數值形成的峰形不規則。

　　（4）洗脫流速0.4 mL/min，上樣量為1 mL：溶液測試結果分辨率偏低，形成的峰形不明顯，處于平穩狀態，不滿足分離純化要求。

　　（5）洗脫流速0.3 mL/min，上樣量為5 mL：溶液測試結果分辨率較高，形成的峰形不明顯，不滿足分離純化要求。

　　3.3 工藝優化

　　依據分離純化試驗結果，洗脫流速0.4 mL/min，上樣量3 mL為蛋白分離純化最佳條件。在實踐應用中，通過調節洗脫流速、上樣量兩項參數，為蛋白分離純化創造最佳處理環境，從而高效去除雜質。采用此方法與以往的分離純化方法處理葵花籽粕蛋白，測試結果表明，文章提出的優化方法蛋白純度比純化前提高了39.21%，可以作為蛋白生產加工工藝。

　　4 總結

　　文章圍繞葵花籽粕蛋白提取及分離純化工藝的優化展開研究，包括兩項試驗內容：（1）蛋白提取正交試驗，測試結果表明，料液比1:14（g/mL）、NaCl濃度1.5 mol/L、溫度50 ℃、提取時間1.5 h為最佳蛋白提取工藝；（2）蛋白分離純化試驗，測試結果表明，洗脫流速0.4 mL/min，上樣量3mL為蛋白分離純化最佳條件。

　　參考文獻

　　[1]張崟,熊偉,郭思亞,等.發酵菌融合蛋白中鮮味八肽的分離純化工藝優化[J].中國調味品,2018,43(1):26-29,34.

　　[2]馬武生,孫長花,張占軍,等.響應面法優化可溶性花生粕蛋白提取工藝[J].食品研究與開發,2017,38(21):39-45.

　　[3]石太淵,葉春苗,于淼,等.低溫壓榨花生餅粕中蛋白質提取功能性質研究[J].食品工業,2017,38(12):111-114.

　　作者包少文